СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ ДИАГНОСТИКИ БРУЦЕЛЛЁЗА.
Сыздыков М.С., Кузнецов А.Н., Бердалиева Ф.А., Денисов Г.И.
Казахский научный центр карантинных и зоонозных инфекций
Независимый исследовательский экологический медико-биологический центр, г. Алматы, Казахстан
Известно, что инфекционный процесс при бруцеллёзе характеризуется наличием сочетанной бруцеллёзно-фаговой антигенемии, сопровождающейся выработкой в организме больного как противобруцеллёзных, так и противофаговых антител [Ишакву Иса, 1999]. Поскольку уровень противобруцеллёзных антител подвержен значительным колебаниям в зависимости от исходного состояния иммунного статуса (в том числе и обусловленного влиянием на него перекрёстнореагирующих гетерологичных микроорганизмов) и уровня активности инфекционного процесса, для повышения выявляемости инфицирования бруцеллами рекомендуется использование в классических серологических тестах (РА, РСК) сочетанного бруцеллёзно-фагового антигена [Сарымсакова Б.Е., 1999]. Однако до настоящего времени отсутствует диагностикум, удовлетворяющий подобным требованиям, поскольку существующие диагностические препараты основаны на антигене бруцелл, т.е. представляют собой монокомпонентную смесь. Устранить данный недостаток и явилось целью настоящей работы.
Материалы и методы.
Нами был разработан бруцеллёзный антигенный диагностикум с добавлением специфического (B. melitensis) бактериофага. Чувствительность и специфичность диагностикума была повышена за счёт выработки у людей, инфицированных бруцеллами козье-овечьего вида (в том числе и при микст-инфекции с перекрёстнореагирующими гетерологичными микроорганизмами), антифаговых антител, что позволяет улучшить лабораторную диагностику маломанифестных форм бруцеллёза.
Для разработки диагностикума нами применялась взвесь антигена штамма Brucella ovis или canis в SR-форме, содержащая специфический (мелитензис) фаг, для реакции агглютинации в 6%-ном растворе хлорида натрия.
Три референтных штамма (Brucella melitensis 16M, B. abortus 544, B. suis 1330) использовались в качестве контрольных.
Для оценки качества и работоспособности реагентов разработанного диагностикума, соответствия нормам и унифицированным методам исследования, сравнимости результатов данного набора с результатами аналогичных наборов других фирм были проведены испытания набора "Диагностикум бруцеллёзный антигенный, содержащий специфический фаг" для реакции агглютинации в очагах бруцеллёза в гиперэндемичном регионе (Жамбылская, Восточно-Казахстанская и Южно-Казахстанская области Республики Казахстан) с сериями коммерческих сывороток гомологичных и гетерологичных микроорганизмов.
Также для сравнительного определения чувствительности и специфичности диагностикумов были исследованы сыворотки больных детей в очагах на наличие антител: 32 - с диагнозами острый и подострый бруцеллёз, 34 - вторично-хронический бруцеллёз, 112 - с другими диагнозами (сальмонелёз, кишечный иерсиниоз, кишечная инфекция неустановленной этиологии). Возраст больных во всех группах колебался от 5 до 14 лет.
Результаты.
Специфичность диагностикума определяли с сыворотками перекрёстнореагирующих гетерологичных близкородственных микроорганизмов: туляремийными, сальмонеллёзными, кишечноиерсиниозными O9 и O-холерными путём постановки реакции Хеддльсона и реакции Райта. Перекрёстных серологических реакций не выявлено, что свидетельствует о специфичности препарата.
Исследования проводились на сыворотках крови больных детей в трёх параллелях, в качестве контроля использованы диагностикумы единые бруцеллёзные антигенные производства Казахского научного центра карантинных и зоонозных инфекций (КНЦКиЗИ) имени М.Айкимбаева (Казахстан), а также диагностикумы единые эритроцитарные бруцеллёзные производства Государственного унитарного предприятия по производству бактериологических препаратов имени Г.Н.Габричевского г. Москва (Россия).
При остром и подостром бруцеллёзе титры антител в реакции агглютинации (РА) с контрольными диагностикумами определялись в разведениях от 1:49,99±0,3 до 1:399,94±0,3, в РА с разработанным нами диагностикумом - от 1:24,99±0,4 до 1:3194,98±0,3. РА со всеми диагностикумами была положительной у одинакового числа больных детей, однако титры при использовании диагностикума на основе многокомпонентной смеси с добавлением специфического бактериофага были выше.
У больных с хронической формой бруцеллёза антитела в РА с контрольными диагностикумами были выявлены в титрах от 1:49,99±0,3 до 199,98±0,3, а в РА с разработанным нами диагностикумом - от 1:49,99±0,3 до 1:399,96±0,2.
Таким образом, разработанный нами диагностикум на основе многокомпонентной смеси с добавлением специфического бактериофага является более чувствительным, чем контрольные как на ранних стадиях заболевания (острый, подострый бруцеллёз), так и в поздней стадии (хронический бруцеллёз). Специфические противобруцеллёзные и противофаговые антитела, вывляемые в хронической стадии, могут служить ориентиром в трудно диагностируемых случаях хронического бруцеллёза.
При постановке РА с контрольными диагностикумами в группе детей с другими диагнозами положительные результаты наблюдали лишь в случае кишечного иерсиниоза, однако средние титры при данной инфекции были ниже по сравнению таковыми у больных бруцеллёзом в 24 раза и не отмечалось нарастания титров в парных сыворотках. Изучение специфичности диагностикума на основе многокомпонентной смеси показало, что ни в одном случае не отмечалось ложноположительной реакции при постановке РА у детей, инфицированных гетерологичными микроорганизмами.
Выводы.
1. Реактивы испытанного диагностикума на основе многокомпонентной смеси с добавлением специфического (B. melitensis) бактериофага - экспериментально-серийные (рабочие) и годны для применения.
2. По результатам испытаний диагностикум бруцеллёзный антигенный, содержащий специфический фаг, работает синхронно, надёжно и по качеству не уступает аналогичным контрольным диагностикумам. Разброс результатов, полученных на реактивах разработанного набора и на реактивах контрольных наборов не превышает 5%.
|
|
| 
